FISH检测原理是什么？与ddPCR应用的区别？
发布时间：
2023-03-27
FISH的检测原理
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization)，简称FISH。基本原理：应用荧光染料标记探针DNA，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA按照碱基互补的原则进行杂交，形成可被检测的杂交双链核酸，在荧光显微镜下观察并记录结果。
FISH检测原理是什么？与ddPCR应用的区别？
由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而探针可以直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特异性高和实现多重染色等特点。
ddPCR原理简介
微滴式数字PCR(ddPCR)在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理，将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后，逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。
FISH检测原理是什么？与ddPCR应用的区别？
适合于拷贝数变异研究、复杂来源样品中含量极低核酸分子的检测、NGS数据验证、NGS测序文库的鉴定、miRNA等差异微小的基因表达研究。
FISH与ddPCR应用比较：
FISH是传统的活检，依赖于患者原发组织，在临床中可以检测CNV、Fusion等;ddPCR是新兴的活检技术，因其灵敏度高，一般用于SNP位点的液体活检，也有如MET和HER2等扩增检测。例如，HER2检测可以对乳腺癌患者能否用靶向药物赫赛汀进行建议，FISH是HER2检测的金标准，而ddPCR技术通过血液检测用以帮助难以获取组织的患者提供用药指导，弥补了应用条件上的不足。
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